隨著測序技術的發展，生命科學研究早已進入了單細胞時代，可以從單個細胞的維度上探究細胞、組織、器官的發育過程和疾病相關的細胞異質性和同質性問題。生物學問題通常是呈現多維度、復雜的時空網絡狀的。

青蓮站在巨人的肩膀上，總結牛人經驗，克服了微量細胞蛋白組學研究三大難點，下面我們來看看牛人已經發表的方法吧！

想要檢測單細胞，首先要突破如何分離單細胞。

FACS熒光激活細胞分選配合nanoPOTS芯片進行分離。[2]

在顯微鏡的輔助下，使用毛細管直接從細胞懸浮液中吸取單個細胞至nanoPOTS中進行后續操作。[1]

樣品量極少，酶解效率低。常規蛋白組樣品前處理方法僅適用于大量細胞樣品的處理；微量樣本體系小，酶解效率需要優化提高。適當放大反應體系，提高酶切效率，研發新的實驗流程，降低實驗過程損失。

微流控技術：單個細胞鑒定211個蛋白，使用Match between Runs (MBR）鑒定到669個蛋白。[3]

TMT標記單細胞定量蛋白組學：整個實驗在離心管中完成，Carrier的存在可以降低單細胞樣本的損失，且肽段序列鑒定提供足夠的離子，單個細胞鑒定757個蛋白。[6]

單細胞蛋白組學分析中，無法直接使用常規色譜質譜參數，要提高色譜的分辨率和質譜采集方法。降低色譜柱內徑，降低流速，明顯改善鑒定結果。

當色譜柱內徑從75下降到30um，流速從350下降至60nl/min,可見譜圖強度有明顯提高[5]

當流速從50降低至20nl/min ，肽段鑒定數量增加~50%，蛋白鑒定數量增加~30%，低流速更有助于微量樣本分析。[1]

樣本類型：原代培養的細胞、組織解離后細胞、體液中分離出的細胞

送樣標準：

參考文獻

[1] Anal. Chem. 2020, 92, 2665?2671

[2] Angew. Chem. Int. Ed., 2018, 57: 12370-12374

[3] Zhu et al. Nature Communications, 2018,9, 882

[4] Analytical and Bioanalytical Chemistry volume, 2019, 411: 4587–4596

[5] Zhu et al. Int. J. Mass Spectrom.,2018,427, 4–10.

[6] Budnik et al. Genome Biology (2018) 19:161 ASMS2019 poster ThP722