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蛋白質組學(英語:proteomics,又譯作蛋白質體學),是以蛋白質組為研究對象,研究細胞、組織或生物體蛋白質組成及其變化規律的科學。這個概念早是在1994年,由Marc Wikins首先提出的新名詞。
上周二分享了蛋白產品相關問題(二),本周二將分享蛋白產品相關問題(三)~
11. mix 樣本的設置目的及設置方法
答案:設置內參通道是為了保證校正不同 run 之間信號和儀器狀態差異,減小系統誤差,從而使得不同run的樣本能夠一起進行數據分析。mix 樣本是用所有需要一起進行數據分析的樣本混合物。
12. iTRAQ/TMT為何不能用于差異較大的物種或樣本?
答案:這主要是由于iTRAQ/TMT的技術特點所決定的。標記定量的數據分析都是基于共有蛋白進行的,蛋白會被過濾掉,無法進行后面數據分析,因此不能用于差異較大的物種或樣本。
13. 同一批上機的 iTRAQ/TMT 樣本,為何不能選取其中部分樣本單獨來分析?
答案:iTRAQ/TMT 是混樣上機的,數據質控是以 run(即開始分的餾分)為單位分析。獲得的總蛋白是所有上機樣本的共有蛋白。所以沒有辦法再單獨分析。
14. 標記類產品為何差異倍數會偏???
答案:因為標記類產品(iTRAQ、TMT)本身試劑特點,樣本實際的差異倍數會有壓縮現象。因此差異倍數一般在 1.2,就可以說明有差異足夠明顯,而對于非標記類的產品如 label free 、DIA,一般差異倍數要達到 1.5 才能說明問題。
15. 通過 iTRAQ/TMT 實驗,是否可以尋找不同樣本之間的有無差異蛋白或蛋白
答案:不可以,有如下幾個原因:
iTRAQ 實驗結果使用的是Proteome Discoverer 軟件搜庫,該軟件的算法分析對于很大和很小值均會賦值;
A.對于蛋白的定量,軟件采用的是肽段水平合并檢測,很難排除其他相似離子干擾;
B.少量無定量值的蛋白可能是沒有檢測到肽段,或者是報告離子峰太低,并不能說明沒有該蛋白。
本周的FAQ就到此結束啦~
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