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        蛋白質組學

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        生物藥表征——排阻色譜法純度測定

        生物藥表征——排阻色譜法純度測定

        • 所屬分類:生物藥表征
        • 瀏覽次數:
        • 發布日期:2022-04-12 11:00:23
        • 產品概述
        • 案例解析

        排阻色譜法(Size Exclusion Chromatography,SEC)又稱尺寸排阻色譜法、分子排阻色譜法、凝膠排阻色譜法、空間排阻色譜法,是液相色譜的一種主要分離模式。主要用于分離大分子,從而實現高聚物的相對分子質量分級分析以及相對分子質量分布測試,還可分離油溶性和水溶性物質。目前,SEC技術正被越來越多的應用于天然聚合物、合成聚合物和蛋白質的分離與表征,生物藥的純度是生產質控的重要指標之一。




        儀器構造

        HPLC-SEC系統主要由溶劑輸送系統、進樣系統、分離系統、檢測系統、數據處理系統組成。操作簡便快捷、數據可靠且重現性好,自動化程度較高。


        排阻色譜的色譜柱填料是凝膠,凝膠表面有不同尺寸的多孔網狀結構,小分子物質進入色譜柱時由于擴散作用進入凝膠內部被滯留,大分子物質通過時被排阻在凝膠顆粒外面,在顆粒間迅速通過,從而實現分子篩效應,將混合物按照分子量大小分開。分子量越小離開色譜柱的時間越長,依據色譜峰是否單一來判斷樣本的純度。



        結果展示


        色譜圖-數據采集系統將檢測器響應為色譜圖中保留時間的函數,對色譜圖下的峰進行積分確定峰面積,該峰面積與樣本中組分存在濃度成正比。使用較高效液相進行純度分析。依據色譜峰的保留值進行定性分析;根據色譜峰的峰面積或者峰高進行定量分析;根據色譜峰的單一性來判斷樣本的純度。


        送樣標準


        蛋白質樣品可以是干粉、溶液;蛋白純度>95%;蛋白質量>500 μg,濃度0.5μg/μL以上;


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