等電點是一個分子表面不帶電荷時的pH值。蛋白質是兩性電解質，其等電點和它所含的酸性氨基酸和堿性氨基酸的數量比例有關。當溶液在某一特定pH值的條件下，蛋白質所帶正電荷與負電荷恰好相等(總凈電荷為零)時，在電場中既不向陽極移動，也不向陰極移動。

隨著現代醫藥工業的發展，出現了大量的蛋白質和多肽類藥物分子，等電點是其重要的理化參數，對這些蛋白質多肽類藥物分子等電點的分析已成為醫藥工業質量控制的重要環節。例如：在復合抗體藥物的質量控制中，各單克隆抗體組分的含量是保證產品的藥效、安全性和批間重復性的重要指標。由于各單克隆抗體通常具有較高比例的同源序列，其分子量、分子結構和理化性質非常接近，常用的多數分析方法如體積排阻色譜、毛細管凝膠電泳等方法均無法區分這些不同的單克隆抗體組分，因而不適用于復合抗體藥物的組成和含量分析這一目的。等電點是單克隆抗體的固有性質之一，不同的單克隆抗體由于氨基酸組成、序列和空間結構不同，等電點通常具有明顯的差異，因而可以利用不同單克隆抗體的等電點差異對其進行分離和定量。毛細管等電聚焦 (cIEF) 在毛細管電泳技術測定兩性物質等電點的基礎上，實現對樣品中不同組分的等電點分離和檢測。

電荷變化是測定單抗藥物降解變靈敏快速的方法之一，已經被國內外生物制藥企業廣泛采用。

檢測方法

全柱成像毛細管等電聚焦電泳（iCIEF）為Proteinsimple創全景式動態等電聚焦分析技術，已經成為等電點檢測及電荷異質性分析的行業金標準

實驗儀器和材料

Proteinsimple公司Maurice快速全自動蛋白質表征分析系統

實驗原理

通過毛細管等電聚焦電泳，將樣本中蛋白質基于等電點不同而分離，280nm的紫外光照射下CCD檢測器檢測不同等電點蛋白質的光吸收峰，從而得到該樣本中蛋白質的特征譜形。

結果展示

利用iCIEF監視貯存過程中蛋白的電荷異質性，作為產品穩定性評估的一部分。結果顯示，在3個月的存儲期間（22℃），CRM197的酸性峰（pI 5.77和5.82）增加，而主峰（pI 5.9）降低

樣品要求：蛋白純度>90%；蛋白質量>100 μg，濃度0.5μg/μL以上。